(三) FACS分析两组DC表面标志表达情况（图3）
FACS 结果显示，基因转移组DC 共刺激因子CD80（B7-1）、CD86（B7-2）以及CD40 的表达比例分别为78%、83%、79%，均明显高于对照组DC的15%、64%、53%。
(四) FACS分析两组DC激活的T细胞中CD8/CD4和CD8/CD56情况（图4）FACS分析两组DC激活的T细胞亚群中，基因转移组的CD8/CD4和CD8/CD56分别为3.24 和5.54均明显高于对照组DC激活的T细胞的1.12 和0.78。
(五) 51Cr 释放法测量DC激活的T细胞的杀伤效率：DC激活的T细胞的细胞毒试验结果（表1）
由表1 可知，基因转移组T细胞对BA46阳性的靶细胞Hs578T有明显的杀伤（48.5%），而对照组T细胞无明显杀伤（7.8%），两者比较有显著性差异。而且，当加入MHCI类抗体W6/32 时，基因转移组T细胞对Hs578T 的杀伤率明显下降，仅为12.3%，说明此杀伤具有MHC 限制性；当靶细胞是K562 时，该T细胞对其杀伤也是较少的，仅为8.2%，说明了此基因转移组T细胞Hs578T的杀伤是特异的。
三、 讨论
乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤，DC瘤苗有望成为该病一种全新的治疗手段，已有采用DC瘤苗治疗乳腺癌的临床试验正在进行之中[6]。制备DC瘤苗的方法常用有抗原肽直接冲击和抗原基因转移等方法，而抗原肽直接冲击法存在一定的不足：(1)抗原肽有一定的半衰期(比如t1/2[Her-2/neu]≤30min)，不利于多次刺激；(2)目前使用的抗原肽大多来源于细菌表达的基因工程产品，此类蛋白缺少真核细胞对蛋白翻译后的进一步修饰。而采用抗原基因转移制备DC瘤苗有望克服上述不足。
在基因转移载体的选择上，除了要求抗原基因能成功转移外，还要能长期稳定表达，所以本研究选择腺相关病毒（AAV）为载体，AAV可成功转导DC，并特异整合于人19号染色体上，从而实现转移基因的长期稳定表达[5]，我们的前期研究结果充分说明了的BA46基因能成功转移DC，并有明确的表达[4]。采用基因转移制备DC，除了保证抗原基因的成功转移和表达外，还要考虑基因转移后对DC成熟及功能的影响。本研究发现，以AAV 为载体转移抗原基因BA46至DC前体细胞后，不会影响DC的成熟，在常规外源性细胞因子GM-CSF和IL-4的作用下，第7 天的DC即呈现典型的DC形态，外形不规则，细胞表面有大量长短不一的树突。在功能方面，共刺激因子CD80、CD86、CD40是DC功能的重要标志，而基因转移组DC 在这三组细胞表面标志均有很高比例的表达，且明显高于对照组(采用细胞裂解物刺激制备)的DC。
DC的功能最重要的体现是诱导T细胞，本研究采用基因转移制备的DC所诱导的T细胞在CD8＋比较明显高于对照组T 细胞，这可能与抗原递呈途径有关，采用基因转移制备DC 的方法，由于抗原基因已整合于细胞的染色体内，抗原的递呈途径主要是采用内源途径，因此主要诱导CD8＋的T细胞。在功能试验(杀伤效率)上，基因转移组T 细胞对抗原阳性的靶细胞的杀伤明显好于对照组T 细胞，而且此杀伤有MHC限制性和明显的抗原特异性。
采用基因转移的方法，成功制备表达乳腺癌抗原BA46的DC，并诱导具有强大特异杀伤功能的T细胞，为以BA46为靶抗原的乳腺癌DC疗法打下基础。
参考文献(略)
