相比于CAR-T细胞疗法，CAR-DNT 细胞疗法并不为人熟知。然而中国很可能诞生全球首个获批临床应用的 CAR-DNT 细胞药。
CAR-T 的阿喀琉斯之踵
DNT（Double Negative T，双阴性 T）细胞是指人外周血中正常存在的 CD3+ CD4- CD8- 的 T 细胞亚群，占 T细胞总数的 3％～5%[1]。
加拿大多伦多大学医学院张丽教授团队是国际上最早发现和研究DNT 细胞的团队之一，2000 年在在国际顶级医学期刊《Nature Medicine》发表论文，第一次报道了 DNT 细胞具有抗原特异性抑制移植排斥反应的功能特征和机理[2]。
DNT 细胞表面表达 CD3 分子和 αβ- 或 γδ-T 细胞受体（T Cell Receptor，TCR），但不表达 CD4 和 CD8 分子，因此不同于常规的 T 细胞、NK 细胞和 NKT 细胞。DNT 细胞无需基因编辑，天然具备作为通用型细胞治疗产品的特征，即异体来源的 DNT 细胞不引起移植物抗宿主病（GvHD）和宿主抗移植物反应（HvGR）。
自 2017 年全球首个 CAR-T 细胞产品 CTL019 在美国获批以来，当前全球已有 9 款自体的 CAR-T 细胞产品获批，包括中国 3 款自体 CAR-T 细胞产品获批。但自体 CAR-T 疗法面临因价格昂贵而可及性差，制备周期长，以及因患者自身 T 细胞质量差等因素导致无法制备自体 CAR-T 细胞等发展瓶颈问题。
2022 年底，国际顶尖临床专业杂志《Lancet Hematology》在线发表系列综述，阐述细胞治疗在中国的进展[3]。文中提出除靶点创新，增强功能，减少副反应之外，开发通用型（Universal）细胞疗法以提升细胞疗法的可及性是下一代 CAR-T 细胞产品发展的重要方向之一，然而 GvHD 是阻碍通用型细胞疗法广泛应用的主要挑战之一。
瑞顺生物董事长兼首席科学官杨黎明博士则更进一步，他认为不仅要开发安全有效的通用型细胞疗法，而且还必须是 Off-The-Shelf（现货）通用型，这样才能使免疫细胞疗法像药一样获得临床普及应用，成为真正意义上的颠覆性细胞治疗药品，这也是 CAR-T 细胞产品实现商业化突破的难点之一[4]；而 CAR-DNT 细胞在这方面则具有天然优势。
「现货通用」的开发历程
杨黎明博士曾在张丽教授实验室作为联合培养博士生和博士后，从事转基因小鼠抗原特异性移植耐受研究，第一次在建立 T 细胞克隆的实验中意外发现 DNT 细胞，是 2000 年《Nature Medicine》文章的共同第一作者[2]。
杨黎明博士早在 90 年代初期就在上海第二医科大学（现上海交通大学医学院）上海市免疫学研究所作为课题负责人，带领团队开展了 LAK 细胞和 TIL 细胞的基础和临床应用研究，发表了系列相关学术论文。作为临床医学专业毕业的科研人员，杨博士对于将实验室研究成果进行临床转化有一种发自内心的冲动，而 DNT 细胞为这种冲动带来了最大的释放，并很有可能让中国的现货通用型免疫细胞疗法的临床开发和商业化走在世界前列。
2012 年杨黎明博士从美国回国创立了瑞顺生物并于 2017 年把开发基于 DNT 细胞产品的现货通用型免疫细胞疗法作为公司战略发展重点。
瑞顺生物研发的第一款产品 RC1012 注射液是一款非基因编辑的同种异体 DNT 细胞免疫治疗生物制品，2020 年 11 月获国家药品监督管理局（NMPA）批准开展治疗复发/难治急性髓系白血病（Relapsed and Refractory Acute Myeloid Leukemia，r/r AML）的 Ⅰ 期临床试验，是国内首个被批准用于注册人体临床试验的从健康捐赠者外周血提取并在体外扩增获得的通用型免疫细胞新药。
中国科学技术大学附属第一医院血液内科朱小玉教授团队、张丽教授团队以及瑞顺生物团队共同在 2020 年《Blood》和 2022 年《American Journal of Hematology》发表研究文章，报道了 RC1012 注射液用于治疗移植后复发 AML 的安全性和有效性的结果[5,6]：
√ 在入组的 12 例移植后复发 AML 患者中，最终 10 例完成 3 次第三方健康供者 DNT 细胞回输。所有患者 DNT 细胞回输后安全性好，无移植物抗宿主病（GvHD）发生。
√ DNT 细胞 3 次回输后疗效评估，总反应率 50%（5/10），1年的总生存率（OS）为 60.0%。长期完全缓解率（CR）为 40%，达到 3.8 年，生存最长患者的 CR 已超过 49 个月。
如果说治疗 r/r AML 是 DNT 细胞产品进军通用型免疫细胞疗法「打响的第一枪」，那 2022 年 8 月 NMPA 批准 RC1012 注射液细胞制剂类型由新鲜制剂变更为冻存制剂则是 DNT 迈向「现货通用」的一个里程碑，成为全球首款未经基因编辑的现货通用型 DNT 细胞治疗产品获批用于人体的注册临床试验。
杨黎明博士指出，细胞制剂从新鲜变更为冻存制剂，看上去只是剂型改变，其实对通用型细胞产品来说这是一个质的飞跃，使细胞疗法与大家熟知的其它药物一样，成为现货可取的产品，真正具备了药物的属性。
「相比于其它细胞疗法平台——比如 NK 细胞，现货通用型 DNT 细胞在冷冻后复融仍可保持很高的生物活性」，杨黎明透露。
CAR-DNT 细胞疗法的中国雄心
2017 年至今是 CAR-T 疗法研发及临床应用在全球高速发展的六年，也是卯足了劲专注于开发现货通用型 DNT 细胞疗法的瑞顺生物急速狂飙的六年。
瑞顺生物在研的第二款现货通用型 DNT 细胞产品 RJMty19注射液带了点「火药味」，因为这是一款带上了 CAR 的第二代增强型 DNT 细胞产品，即靶向 CD19 的 CAR-DNT 产品。在当前美国和中国获批的 9 款 CAR-T 细胞疗法中，有 6 款是靶向CD19。
杨黎明博士指出，不同于 CD19-CAR-T，RJMty19 注射液无需对健康捐赠者来源的 DNT 细胞进行基因敲除以避免 GvHD 和HvGR，可直接引入 CAR 基因片段而实现现货通用型 CAR-DNT 细胞的制备，极大地提高了开发效率和安全性。
进入 2023 年下半年，RJMty19 注射液的研发提速前行。
2023 年 10 月 24 日，RJMty19 注射液治疗复发/难治性 B细胞非霍奇金淋巴瘤（r/r B-NHL）的适应症 IND 申请又获 NMPA 药品审评中心（CDE）正式受理。
而在此不到一个月前（2023 年 9 月 26 日），RJMty19 注射液用于治疗复发/难治性自身免疫性疾病的新药研究申请（IND）获 CDE 受理。
在全球范围内，目前尚未有任何 CAR-T 细胞产品上市治疗自身免疫性疾病，但国际上对于 CAR-T 细胞治疗自身免疫性疾病的关注热度正持续上扬。瑞顺生物在该赛道的快速布局有望让在价格、可及和使用便捷性方面较自体 CAR-T 细胞产品都具有显著优势的 CAR-DNT 细胞产品的临床开发与 CAR-T 基本同步。这对于 CAR-DNT 进入主流，与 CAR-T 并驾齐驱意义重大。
作为 CAR-T 细胞产品的追赶者，CAR-DNT细胞对于新靶点的开发可以瞄准 CAR-T 细胞的成熟靶点，但是让瑞顺生物对未来信心满满的最重要「定海神针」还是 DNT 细胞在开发现货通用型细胞疗法上的天然优势和这些年积累的经验和临床数据。
「当前的 CAR-T 细胞必须 1 对 1 制备，即一个患者一个 CAR-T 细胞产品, 无法通用，导致目前的 CAR-T 疗法价格昂贵，多数患者不可及；而 DNT 细胞的天然优势以及瑞顺生物在制备现货通用型 DNT 细胞上的领先优势不但能让中国在细胞治疗领域有可能站在前列，引领世界，而且可以让中国患者首先从更安全，更可及、更方便使用的治疗中得到巨大的生存获益，这是我们目前设立的追求目标」，杨黎明博士平静地说。
瑞顺于 2017 年获得 Pre-A 轮融资，2021 年再获 1.37 亿人民币的 A 轮融资，2022 年完成 5900 万元人民币 A＋ 轮融资。 身处高投入、高风险的生物制药行业，瑞顺生物的未来发展离不开持续的资本投入。对此杨黎明博士表示，DNT/CAR-DNT 细胞在临床治疗上的数据已证明了该细胞的市场潜力，当前其发展的一个关键是让更多的中国医生了解 DNT/CAR-DNT 细胞产品的潜力，有更多研究者愿意发起或参与临床研究。
研究者发起的临床研究（IIT）在推进 RJMty19 注射液治疗 r/r NHL 的注册临床研究申请过程中发挥了重要的作用。就在该产品治疗 r/r NHL IND 申请获 CDE 受理之前，今年 8 月，由浙江大学医学院附属第二医院血液科发起并开展的 RJMty19 注射液治疗 r/r NHL 的临床研究（NCT05453669）取得了突破性成果，已被 2023 年美国血液学会（ASH）年会接受，将在今年 12 月以墙报形式展示。
√ 12 名患者完成 DLT 评估（剂量限制性毒性），均未观察到 ≥ 3 级细胞因子释放综合征（CRS）、移植物抗宿主病（GvHD）、免疫效应细胞相关的神经毒性综合征（ICANS）、严重不良事件（SAE），临床安全性良好。
√ 在临床疗效方面，随着剂量增加，临床疗效显著提升；第 4 剂量组 3 例受试者在单次给药后都获得不同程度的临床缓解，客观缓解率（ORR）为 100%（3/3），完全缓解率（CRR）为 33.3%（1/3）。
「药物研发是一个极其严谨的科学探索过程，因为我们需要极其可靠的临床研究数据和循证医学证据来证明药物的临床疗效和安全性」，杨黎明博士指出，「但只要选对赛道且手握好药，再冷的寒冬我们也有信心穿越！」
参考文献：
[1] Lee JB, Kang H, Fang L, D'Souza C, Adeyi O, Zhang L. Developing Allogeneic Double-Negative T Cells as a Novel Off-the-Shelf Adoptive Cellular Therapy for Cancer[J]. Clin Cancer Res. 2019;25(7):2241-2253.
[2] Zhang ZX, Yang L, Young KJ, DuTemple B, Zhang L. Identification of a previously unknown antigen-specific regulatory T cell and its mechanism of suppression[J]. Nat Med. 2000;6(7):782-789.
[3] YHu Y, Feng J, Gu T, et al. CAR T-cell therapies in China: rapid evolution and a bright future. Lancet Haematol. 2022;9(12):e930-e941.
[4] Depil S, Duchateau P, Grupp SA, Mufti G, Poirot L. 'Off-the-shelf' allogeneic CAR T cells: development and challenges[J]. Nat Rev Drug Discov. 2020;19(3):185-199.
[5] Tang B, Lee JB, et al. Safety and efficacy of ex vivo expanded healthy donor-derived double negative T cells for the treatment of AML relapsed after allogeneic stem cell transplantation: A first in-human phase I/IIA clinical trial[J]. Blood. 2020; 136(1–2).
[6] Tang B, Lee JB, Cheng S, et al. Allogeneic double-negative T cell therapy for relapsed acute myeloid leukemia patients post allogeneic hematopoietic stem cell transplantation: A first-in-human phase I study[J]. Am J Hematol. 2022;97(7):E264-E267.
