EGFRTKI敏感与耐药肺癌细胞信号通路表达差异的探讨

广东省肺癌研究所 广东省人民医院 费世江 张绪超 田红霞 黄玲 吴一龙

目的：探讨表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(TKI)敏感肺腺癌细胞和耐药细胞PI3K/Akt/mTOR、Ras/Erk及Jak-STAT3信号通路的表达差异，寻求EGFR-TKI耐药后有效分子标靶。

方法：选取四种人肺腺癌细胞株作为实验模式细胞，包括PC9细胞(TKI敏感细胞，EGFR19外显子缺失)，PC9GR细胞(PC9细胞吉非替尼诱导耐药细胞株)，H1650细胞(TKI耐药细胞，但EGFR19外显子缺失)及H1975细胞(TKI耐药细胞，EGFR21外显子L858突变及T790M突变)。在基础状态下通过western blot检测PI3K-Akt-mTOR、ERK及Jak-STAT3信号通路相关蛋白分子磷酸化表达水平，通过免疫沉淀及激酶活性分析检测敏感和耐药细胞株基础状态下mTORC2激酶活性。

结果：Western blot结果显示PC9、PC9GR、H1650、H1975四种细胞株基础状态下mTOR、Rictor和Raptor均有较高表达，显示四种细胞株间mTORC1和mTORC2复合物均有较高表达。三条信号通路的p-Akt Ser473、p-Erk1/2及p-STAT3 Tyr705的磷酸化表达水平通过Fluochem 8900软件进行蛋白灰度扫描(内参校正)显示在敏感细胞和耐药细胞间有较大差异，上述三个分子在 PC9、PC9GR、H1650、H1975细胞间的比值分别1：1.22：1.44：1.01、1：1.09：1.51：1.21和1：0.89：0.71：0.86。即在耐药细胞中Akt Ser473和Erk1/2分子磷酸化水平明显高于EGFR-TKI敏感细胞，而STAT3 Tyr705磷酸化表达水平PC9细胞明显高于其他三个耐药细胞株。进一步实验结果发现mTORC2激酶的活性水平在耐药细胞中明显高于敏感细胞，在四种细胞株中其灰度值比值为1：1.18：1.30：1.27。

结论：EGFR TKI敏感与耐药肺癌细胞之间的Akt/mTOR、ERK、STAT3等信号通路活化均有明显差异，mTORC2可能为EGFR TKI耐药后一个较好的潜在分子靶标。mTORC2与Akt、STAT3之间潜在的调控关系需要进一步研究。